灌流细胞培养植物查尔酮异构酶(CHI)ELISA试剂盒性能


  [url=http:///www.genscriptprobio.cn/add-perfusion.html]灌流细胞培养[/url]实验原理
  试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被植物查尔酮异构酶(CHI)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并*洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的植物查尔酮异构酶(CHI)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。
  操作步骤
  从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
  设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
  样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。
  除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
  弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
  每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
  每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。
  实验结果计算
  以所测标准品的OD值为横坐标,标准品的浓度值为纵坐标,在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线,并得到直线回归方程,将样品的OD值代入方程,计算出样品的浓度。
  试剂盒性能
  检测范围:10 U/ml–320 U/ml。
  灵敏度:zui低检测浓度小于1.0 U/ml。
  特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
  重复性:板内变异系数小于10%,板间变异系数小于15%。


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