BsAb抗体的制备基本过程2023

  BsAb抗体的组成极为复杂,是由成千上万、多种多样的免疫球蛋白(Ig)分子所组成。这些Ig分子在形状、大小、结构以及氨基酸的组成和排列上,既相似,又有差别。由于有差别,它们的电泳活性就有很大的变化。
  因为抗体具有与抗原决定簇相对应的结合部位(抗原结合簇),所以抗体与抗原的结合具有特异性。另一方面,抗体本身是一种蛋白质,具有本身的氨基酸组成、排列和立体结构,对异种动物来说,它又是抗原。各类Ig都具有可用血清学方法检出的抗原特异性,它们表现出不同的血清学类型。
  一、几种抗体概述:
  1.抗角蛋白抗体(AKA),又称为抗丝集蛋白抗体或抗角质层抗体。AKA是类风湿关节炎早期诊断和判断预后的指标之一,其对RA患者的诊断的特异性为94% ,而其敏感性为47% ,并是一种鉴别RA和与多发性关节炎相关的丙型肝炎患者的有效检验标记物。
  2.抗核周因子( APF), 是定位于口腔黏附膜细胞胞质内的颗粒性蛋白复合物。可在RA患者的血清和关节液中测出,与性别、年龄无关。APF显示了较强的特异性(73%——99%)和敏感性。用间接免疫荧光法检测,方法精密度较差。
  3.抗环瓜氨酸肽抗体(CCP),具有相对好的敏感度和特异性。其实,抗核周因子和抗角蛋白抗体,与CCP在化学结构上具有相关性,它们的表位都含有瓜氨酸,称为瓜氨酸相关自身免疫系统。
  二、抗体的制备过程:
  1. 免疫原:普通的大分子蛋白,通过分子克隆构建载体并在大肠杆菌中进行诱导表达获得重组蛋白,纯化鉴定后可直接作为免疫原;小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶联载体对该分子进行改造才能使其成为具有免疫原性的抗原,常见偶联载体如BSA、OVA、HAS等。
  2. 免疫动物:常用于制备抗血清的动物有豚鼠、家兔、鸡、大小鼠等,大量时需要用到狗、绵羊、山羊等。
  3. 免疫血清的收集:一般家兔、绵羊、山羊可采用静动脉采血,家兔、豚鼠、大鼠、鸡可采用心脏采血,家兔、山羊、绵羊可采用静脉采血。
  4. 免疫血清的纯化与鉴定:得到的抗血清需要进一步的纯化,利用偶联了抗原的亲和柱进行层析,具有高效,特异性强,纯度高的特定。接着要鉴定纯化蛋白的含量、相对分子的质量、纯度以及特异性。
  5. 免疫血清的保存:抗体一般比较稳定,在-80℃ ——-20 ℃可以保存约5年而不会影响效价,而真空干燥保存时间可以更久。保存前需经除菌并添加防腐剂。

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